Оценка методов инактивирования вируса лейкоза птиц при производстве гриппозных вакцин

При производстве инактивированных гриппозных вакцин на стадии инактивации должен быть инактивирован как вирус гриппа, так и возможные вирусные контаминанты, которые могут попасть в вакцину из сырья (куриных эмбрионов). Одним из возможных контаминантов является вирус лейкоза птиц. Инактиваторы должны обеспечивать гарантированное снижение вирусной нагрузки контаминанта не менее чем на 4 lg/мл, что обеспечит его отсутствие в готовой вакцине. Целью работы было осуществить наработку вируса лейкоза для достижения минимального титра 5 lg/мл, оценить снижение титра вируса лейкоза птиц в полупродуктах гриппозных вакцин при воздействии инактиваторов. В исследовании использовали штаммы вируса лейкоза RAV-1 и RAV-2 и полупродукты гриппозных вакцин, такие как вируссодержащая аллантоисная жидкость и вирусные концентраты. Титры вируса лейкоза птиц определяли методом иммуноферментного анализа. Были подобраны условия наработки вируса лейкоза птиц штаммов RAV-1 и RAV-2 в первичной культуре фибробластов эмбрионов кур (ФЭК); рассмотрены основные используемые инактиваторы — β-пропиолактон и УФ-излучение. Выявлено, что спустя 12 ч инактивации β-пропиолактоном вирус лейкоза птиц штамма RAV-1 показал снижение вирусной нагрузки на 4,61 ± 0,46 lg, а вирус лейкоза птиц штамма RAV-2 — на 4,33 ± 0,33 lg, что указывает на эффективное действие β-пропиолактона при инактивации. Проведение инактивации УФ-излучением позволяет снизить вирусную нагрузку штамма RAV-1 на 4,22 ± 0,31 lg, а штамма RAV-2 на 4,44 ± 0,48 lg за 5 мин.

1. EMA/CHMP/BWP/310834/2012 Rev.1 Committee for Medicinal Products for Human use (CHMP) Guideline on Influenza vaccines — Quality module, 2017.

2. Рекомендации по производству и контролю вакцины против гриппа инактивированной, Приложение 3 серии технических докладов ВОЗ № 927, 2005.

3. Sabbaghi A, Miri SM, Keshavarz M, Zargar M, Ghaemi A. Inactivation methods for whole influenza vaccine production. Rev Med Virol. 2019; 29 (6): e2074.

4. Савина Н. Н., Екимов А. А., Трухин В. П., Евтушенко А. Э., Жиренкина Е. Н., Синегубова Е. О. и др. Оценка методов инактивирования аденовируса птиц при производстве гриппозных вакцин. Медицина экстремальных ситуаций. 2021; (3): 84–9.

5. Плотников В. А., Гребенникова Т. В., Дудникова Е. К., Шульпин М. И., Лазарева С. П., Никонова З. Б., и др. О распространении вируса лейкоза птиц в птицеводческих хозяйствах на территории России. Сельскохозяйственная биология. 2013; 6: 36–42.

6. Bister K, Varmus HE, Stavnezer E, Hunters E, Vogt PK. Biological and biochemical studies on the inactivation of avian oncoviruses by ultraviolet irradiation. Virology. 1977; 77 (2): 689–704.

7. Herrera-Rodriguez J, Signorazzi A, Holtrop M, de Vries-Idema J, Huckriede A. Inactivated or damaged? Comparing the effect of inactivation methods on influenza virions to optimize vaccine production. Vaccine. 2019; 37 (12): 1630–7.

8. Kap M, Arron GI, Loibner M, Hausleitner A, Siaulyte G, Zatloukal K, Riegman P. Inactivation of Influenza A virus, Adenovirus, and Cytomegalovirus with PAXgene Tissue Fixative and Formalin. Biopreservation and Biobanking. 2013; 11 (4): 229–34.

9. Shuo Lei, Xun Gao, Yang Sun, Xiangyong Yu, Longshan Zhao, Gas chromatography-mass spectrometry method for determination of β-propiolactone in human inactivated rabies vaccine and its hydrolysis analysis, Journal of Pharmaceutical Analysis. 2018; 8 (6): 373–7.

10. Руководство по исследованию валидации вирусной очистки: проектирование, вклад и интерпретация исследований, использующих инактивацию и удаление вирусов, EMA CPMP/BWP/268/95, 1996.

11. Фрешни Р. Я. Культура животных клеток: практическое руководство. Пер. 5-го англ. изд. М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2018; 691 с.

12. Li Xue, Dong Xuan, Sun Xiaolong, Li Weihua, Zhao Peng, Cui Zhizhong, Wang Xin. Preparation and immunoprotection of subgroup B avian leukosis virus inactivated vaccine. Vaccine. 2013; 31 (46): 5479–85.

13. Zavala, Guillermo, Sunny Cheng. Detection and Characterization of Avian Leukosis Virus in Marek’s Disease Vaccines. Avian Diseases. 2006; 50 (2): 209–15.

14. Haussmann C, Hauschild F, Jobst B, Novartis AG. Improvements in preparation of influenza virus vaccine antigens. Патент США № US6986808P. 18.03.2008.

15. Burt DS, Jones DH, Lowell GH, White GL, Torossian K, Fries LF. ID Biomedical Corp of Quebec. Proteosome influenza vaccine. Патент США № US18247600P. 15.02.2000.

16. Трухин В. П., Евтушенко А. Э., Красильников И. В., Савина Н. Н., Быков Д. Г., Уйба С. В., Васильев А. Н., Рыськова Е. В., Начарова Е. П., Аракелов С. А., авторы. Федеральное государственное унитарное предприятие «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» Федерального медико-биологического агентства (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России). Способ получения антигена или антигенов для производства противогриппозной вакцины и вакцина на его основе. Патент РФ № RU2019118695A. 14.06.2019.